lunedì 27 settembre 2021

Studio spiega che il vaccino ibrida ed è altamente tossico


Vaccini Covid-19 basati sul vettore adenovirale DNA e SARS-CoV-2 basati su mRNA: possibile integrazione nel genoma umano - I geni adenovirali sono espressi nei vaccini basati su vettori?

da sciencedirect.

In Risalto

• Questa breve recensione è stata presentata qui per facilitare una discussione indipendente e più equilibrata sui potenziali rischi dovuti alla presenza di DNA vettore adenovirus (AstraZeneca, Johnson & Johnson, Sputnik V e altri) o RNA SARS-CoV-2 (BioNTech/Pfizer, Moderna) nei vaccini che dovrebbero proteggere dal Covid-19. Naturalmente, iniezioni di vaccini basati su vettori nel muscolo deltoide umano è una questione diversa dai rari eventi casuali che portano a eventi di ricombinazione tra DNA estraneo e umano in sistemi sperimentali come descritto sopra. Inoltre, al momento non è possibile valutare realisticamente né il tipo né la frequenza delle conseguenze di eventi di integrazione di vettori rari. I risultati recentemente pubblicati sui benefici della protezione contro il Covid-19 offerti dai vaccini BioNTech/Pfizer stanno incoraggiando Dagan et al. 2021]. Certo, la giuria è ancora indecisa se qualcuno dei vaccini proteggerà dalle nuove varianti SARS-CoV-2 più pericolose provenienti da Regno Unito, Sudafrica, Brasile e varianti sconosciute che potrebbero sorgere in futuro, dati i livelli scarsamente controllati di replicazione virale nel mondo. Infine, ignoriamo la protezione vaccinale contro lo sviluppo di sintomi prolungati e ad insorgenza tardiva di Covid-19.•

Le informazioni presentate in questa recensione aiuteranno i futuri vaccinati a valutare una valutazione del rischio rispetto al beneficio, vale a dire gli eventi di integrazione del vettore adenovirus o del DNA della trascrizione inversa dell'RNA SARS-CoV-2 a bassa frequenza rispetto, si spera, all'elevata efficacia e protezione del vaccino. Inoltre, poiché l'infezione da SARS-CoV-2 di per sé può essere associata all'integrazione delle trascrizioni inverse dell'RNA virale  [Zhang et al, 2020], questa serie di eventi potrebbe diventare inevitabile in qualsiasi infezione da SARS-CoV-2. Infine, la misura in cui i prodotti del gene adenovirale potrebbero essere co-espressi con la glicoproteina spike SARS-CoV-2dopo l'iniezione del vaccino vettoriale nei muscoli deltoidi umani rimane non indagato. Al momento non possiamo misurarne i possibili effetti sull'organismo umano, se effettivamente espressi. Opportunità e rischi, entrambi allo stesso tempo, rimangono al di là delle nostre aspettative di controlli assoluti perché la vita e l'evoluzione probabilmente sono state basate su "meccanismi casuali" fin dall'inizio. Osservazioni cliniche su risultati di test RT-PCR positivi di lunga durata che implicano l'integrazione del DNA di SARS-CoV-2nel genoma umano nel corso di alcuni casi di Covid-19, rendono irrealistiche le apprensioni sugli eventi di integrazione associati al vaccino, rispetto ai benefici sperati dalla vaccinazione contro il Covid-19. La popolazione umana del 2021 affronta una crisi biomedica di dimensioni senza precedenti negli ultimi tempi e dovrà accettare le migliori contromisure disponibili contro il Covid-19 del giorno: la vaccinazione.

Astratto

I vigorosi programmi di vaccinazione contro il Covid-19 che causa SARS-CoV-2 sono la principale opportunità per combattere questa terribile pandemia. I vaccini attualmente somministrati dipendono dai vettori del DNA dell'adenovirus o dall'mRNA di SARS-CoV-2 che potrebbe essere retrotrascritto nel DNA, anche se raramente. In alcune società, le persone si sono sensibilizzate contro i potenziali effetti collaterali a breve o lungo termine dell'iniezione di DNA estraneo negli esseri umani. Nel mio laboratorio, il destino del DNA estraneo nelle cellule e negli organismi di mammiferi (umani) è stato studiato per molti anni. In questa recensione verrà presentata una sintesi dei risultati ottenuti. Questa sinossi è stata inserita nel contesto evolutivo delle inserzioni di retrotrasposoni nei genomi preumani milioni di anni fa. Inoltre, studi sul DNA basato su vettori di adenovirus, sarà descritto il destino del DNA ingerito dal cibo e la persistenza a lungo termine di SARS-CoV-2 RNA/DNA. L'effettiva integrazione delle molecole di DNA virale e del DNA vettore di adenovirus saranno probabilmente eventi casuali la cui frequenza e le cui conseguenze epigenetiche non possono essere valutate con certezza. La revisione affronta anche i problemi dell'espressione genica adenovirale residua nei vettori a base di adenovirali e il loro ruolo negli effetti collaterali dei vaccini. Alla fine, si scenderà a soppesare i possibili rischi di inserimenti genomici di DNA estraneo associato al vaccino e livelli sconosciuti di espressione genica adenovirale trasportata da vettori rispetto alla protezione contro i pericoli di Covid-19. Una decisione a favore della vaccinazione contro le malattie potenzialmente letali appare prudente.

Parole chiave

Integrazione del DNA dell'adenovirus nei genomi dei mammiferi
integrazione del DNA del vettore adenovirus nel genoma umano
espressione di geni adenovirali nel vettore DNA
Vaccini SARS-CoV-2 a base di vettore di adenovirus DNA e RNA
conseguenze epigenetiche dell'integrazione di DNA estraneo
retrotrascrizione dell'RNA SARS-CoV-2 in DNA

1 . Affondo

Molti dei vaccini attualmente autorizzati contro la SARS-Coronavirus-2 (AstraZeneca / Università di Oxford , Johnson & Johnson Janssen COVID-19 vaccino , e Sputnik V) si basano su adenovirus vettori del DNA come veicoli per l'informazione genetica per la SARS-CoV-2 glicoproteina spike . I vaccini prodotti da BioNTech/Pfizer o Moderna contengono l'RNA messaggero (mRNA) per la sintesi di questa proteina. Dopo l'iniezione del vaccino, l'mRNA attiverà la sintesi della proteina spike viraledirettamente nei vaccinati. Pertanto, l'interesse pubblico per il destino del DNA estraneo (adenovirale o SARS-CoV-2 a trascrizione inversa) nelle cellule e negli organismi di mammiferi (umani) è diventato acuto e diffuso. Le preoccupazioni delle persone sono state espresse in incontri personali occasionali come: " il vaccino entra nei miei geni "? L'autore sostiene il concetto che il pubblico ha diritto a tutte le informazioni scientifiche su questi temi. Il resoconto qui presentato di precedenti lavori sperimentali sull'integrazione del DNA estraneo e le sue conseguenze fornirà un utile aggiornamento su questi temi di interesse pubblico. Questa sinossi descrive il destino del DNA estraneo nelle cellule dei mammiferi, la sua possibile integrazione nel genoma ospite e le potenziali conseguenze per le cellule transgenomiche ( Doerfler, 2000 , Doerfler et al., 2018 ). Di fronte alla pandemia mondiale di SARS-CoV-2 ancora in espansione, queste informazioni devono essere controbilanciate rispetto ai benefici di un vaccino basato su un vettore di DNA di adenovirus o di un mRNA contro il Covid-19 potenzialmente letale (Coronavirus Disease 2019 ). Non ci sono prove che gli adenovirus umani siano coinvolti causalmente nella tumorigenesi umana, ma nemmeno questa possibilità può essere categoricamente esclusa, in particolare per i vaccini basati su vettori.

Inoltre, nei tumori di criceto indotti da Ad12, la persistenza del genoma di Ad12 nelle cellule tumorali non è richiesta per il mantenimento dello stato trasformato dei tumori indotti da Ad12 (Kühlmann et al., 1982 ). Come discusso di seguito, i fattori epigenetici potrebbero svolgere un ruolo importante nella tumorigenesi dell'adenovirus e perché il loro effetto domini, la persistenza di lunga data del transgenoma non è essenziale ( Doerfler et al., 2018 , Heller et al., 1995 ).

Le possibili sequele a lungo termine del DNA del vettore adenovirale o dell'integrazione dell'RNA messaggero SARS-CoV-2 a trascrizione inversa per la funzionalità e la sopravvivenza delle cellule transgeniche vettoriali non possono essere previste con certezza nei singoli casi. Tuttavia, in questa fase della pandemia di Covid-19, le nostre attività dovranno essere concentrate sulla lotta alla pandemia con vaccini adeguati e future misure terapeutiche. 

2 . Background evolutivo – elementi trasponibili nel genoma umano

Quasi il 50% del genoma umano 3 × 10 9 coppie di nucleotidi rappresenta elementi trasponibili e l'8% costituisce genomi retrovirali endogeni. L'importanza di questo fatto genetico non è stata riflessa attivamente nella ricerca sulla genetica molecolare. Apparentemente, una parte importante del genoma umano odierno è stata inserita gradualmente durante i tempi evolutivi mediante l'integrazione di DNA estraneo o di DNA retrotrascritto da genomi retrovirali di RNA. Analisi più recenti hanno rivelato che gli elementi ripetitivi potrebbero ammontare al 66%-69% del genoma umano ( De Koning et al 2011 ). Le sequenze di DNA estraneo sono diventate frequentemente inattivate attraverso meccanismi epigenetici , cioè dalla metilazione del DNA estraneo e dall'alterazionemetilazione dell'istonestrategie. Si stima che questi antichi eventi di integrazione risalgano a >60-70 milioni di anni fa, forse più a lungo. La loro esistenza e la loro massiccia estensione supportano l'idea che l'inserimento di DNA estraneo nei genomi stabiliti sia stato facilitato da un meccanismo elementare emerso nei primi tempi dell'evoluzione e molto probabilmente ha svolto un ruolo importante nel guidare l'evoluzione. Ancora oggi è possibile trascrivere parti selezionate di queste antiche integrazioni e vi sono differenze interindividuali per quanto riguarda l'estensione dei loro livelli di espressione. Inoltre, gli elementi regolatori presenti negli elementi retrovirali endogeni e nei siti di riconoscimento per le interazioni DNA-proteina svolgono funzioni poco conosciute. La loro importanza per l'organismo umano può essere solo ipotizzata. Alcune parti delle sequenze retrovirali endogene possono diventare sovraespresse nei tumori umani e nelle malattie autoimmuni, nonché nelle infezioni virali, comprese quelle da SARS-CoV-2. Ci sono prove che gli elementi retrovirali endogeni vengono deregolati durante l'invecchiamento. Una panoramica sulla biologia di queste sequenze che spesso sono state erroneamente sottovalutate in quantoDNA spazzatura , è stato presentato di recente (Geis e Goff, 2020).

3 . Sinossi delle analisi precedenti

Il lavoro su e con i vettori di adenovirus si basa sull'affermazione non dimostrata che questi vettori sono sicuri perché il DNA di adenovirus "non si integrerebbe" nei genomi delle cellule riceventi. Non ci sono prove concrete per questa interpretazione. Quindi, la seguente sinossi del nostro lavoro e di quello di altri mette in discussione questa nozione ( Doerfler et al., 1984 ). I problemi incontrati nelle procedure terapeutiche geniche del passato ( Samanathan et al, 2020 ) e attualmente con i vaccini SARS-CoV-2 basati su vettori di adenovirus richiederanno un'approfondita rivalutazione degli inconvenienti che i sistemi di vettori di adenovirus comportano. Naturalmente, il destino del DNA adenovirale intatto e quello del DNA vettore parzialmente difettosoè diverso per alcuni aspetti, sebbene entrambi siano soggetti agli stessi meccanismi di ricombinazione integrativa cellulare. Inoltre, le quantità di DNA vettore di adenovirus somministrate nei programmi di vaccinazione (circa 2,5 µ) sono inferiori a quelle nelle procedure di terapia genica. Si pensa che il DNA vettore dell'adenovirus raggiunga principalmente le cellule del fegato ( Stephen et al, 2010 ) e probabilmente penetri anche nelle cellule del sistema immunitario.

3.1 . Adenovirus tipo 12 genomi nel tumore del criceto e cellule trasformate

• L'adenovirus umano di tipo 12 (Ad12) induce neoplasie neuroectodermiche primitive nel 70-90% dei criceti siriani neonati inoculati con virus , Mesocricetus auratus ( Trentin et al. 1962 ; Hohlweg et al. 2003 ). Il DNA di Ad12 nella linea cellulare tumorale di criceto indotta da Ad12 T637 è stato integrato mediante ricombinazione eterologa in 10-12 copie, frequentemente in un sito genomico selezionato casualmente ( Fig. 1 A, freccia verde, bianca). Non vi è, tuttavia, alcuna prova che nessuno degli adenovirus umani sia implicato nella tumorigenesi umana.



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Figura 1 . L'inserimento di DNA estraneo nel genoma di criceto altera i profili di metilazione del DNA cellulare nelle ~ 900 copie delle sequenze di retrotrasposoni IAP . I modelli di metilazione alterati vengono mantenuti anche dopo la perdita dei transgenomi.

[ A ] L' ibridazione in situ del nucleo di una cellula di criceto trasformata in Ad12 di una cellula T637 visualizza da 10 a 12 copie di DNA Ad12 integrato cromosomicamente ( sonda di DNA Ad12 , freccia verde, bianca); Sonda IAP (rosa) ~ 900 copie di genomi di retrotrasposoni della particella A intracisternale che si trovano frequentemente sui bracci corti dei cromosomi di criceto; Colorazione DAPI (blu) del DNA cellulare.

[ B ] Ibridazione Southern blot di DNA da (da destra a sinistra) Ad12 (adenovirus umano tipo 12); T637 (cellule di criceto BHK21 trasformate in Ad12); BHK21 (linea cellulare renale di criceto); T637; TR3 (un revertant della linea cellulare T637 il cui genoma aveva perso tutte le originali 10-12 copie del genoma virale integrato (confermato dalla PCR); A2497-3 è una linea cellulare di criceto trasformata in Ad12 diversa dalle cellule T637; BHK˖Ad12, BHK21 cellule di criceto infettate in modo abortivo con Ad12 (Doerfler , 1969 , Hochstein et al., 2008 ) .Le 32 sonde di ibridazione del DNA marcate con P sono state designate nella parte inferiore dell'elettroferogramma , Ad12 o IAP (da destra a sinistra).

I livelli di metilazione del DNA CpG nei diversi campioni di DNA sono stati valutati mediante scissione differenziale con endonucleasi di restrizione sensibili alla metilazione (HpaII, HhaI) o insensibili alla metilazione (MspI): MspI scinde 5'-CCGG-3' e 5'-C m Le sequenze CGG-3 (insensibili alla metilazione), HpaII e HhaI (sensibili alla metilazione) non tagliano i siti 5'-C m CGG-3'. I risultati documentano aumenti distinti delle sequenze metilate di CpG nelle linee cellulari transgeniche Ad12 T637 e A-2497-3, come evidenziato dalle grandi quantità di DNA IAP non tagliato di HpaII e HhaI (parte superiore del display). Anche la linea cellulare revertante TR3, derivata dalle cellule T637, mostra un aumento della metilazione del DNA IAP, sebbene abbia perso tutte le copie dei transgenomi Ad12 (confermata dalla PCR). A quanto pare, ilepigenetica effetto (aumento della metilazione del DNA IAP) di inserimento transgene sulla IAP retrotrasposoni DNA persisteva anche dopo la perdita dei transgeni che erano stimolate gli transeffetti epigenetici. Queste cifre sono state prese da (Heller et al., 1995).•

In 58 tumori di criceto indotti indipendentemente da Ad12, più copie di DNA virale sono state integrate in un sito di integrazione cellulare scelto a caso, sebbene le posizioni genomiche di questi siti differissero tra i singoli tumori di origine clonale. In altri due tumori, gli integratori di DNA Ad12 sono stati localizzati ciascuno in due diversi siti nel genoma delle cellule tumorali. In ogni tumore, il DNA integrato di Ad12 era diventato de novo CpG-metilato ( Hilger-Eversheim e Doerfler, 1997 ).•

Maggiore enfasi nelle analisi delle cellule tumorali di criceto trasformate da adenovirus o indotte da Ad12 è stata posta sul clonaggio molecolare e sul sequenziamento di numerosi siti di giunzione tra il DNA dell'adenovirus integrato e il DNA cellulare adiacente per accertare il legame covalente tra il DNA virale e cellulare degli integrati ( Deuring et al., 1981a ; Stabel, Doerfler, 1982 ; Gahlmann et al., 1982 ; ( Deuring et al., 1983 ) Doerfler et al., 1984 , Schulz et al., 1987 ). Il meccanismo di inserimento sembrava simile o identico a quello della ricombinazione non omologa. Omologie di sequenza brevi e spesso irregolariesisteva tra i terminali del DNA dell'adenovirus e la sequenza cellulare mirata nei siti di inserimento adiacenti. In alcuni casi, la sequenza di DNA cellulare ricevente adiacente al DNA virale integrato era trascrizionalmente attiva ( Schulz et al. 1987 ). In uno studio pilota, la ricombinazione inserzionale tra DNA virale e cellulare è stata ricostruita in un sistema privo di cellule da estratti nucleari di criceto utilizzando una sequenza di DNA cellulare pre-inserimento precedentemente identificata e segmenti di DNA di adenovirus terminali come partner di ricombinazione ( Jessberger et al. 1989 ). I prodotti di ricombinazione sono stati analizzati dopo il riclonaggio dalla reazione e hanno mostrato caratteristiche simili a quelle delle cellule trasformate da adenovirus ( Tatzelt et al. 1992 ).


3.2 . Un sistema modello per studiare l'integrazione del DNA di Ad12 nelle cellule di criceto infettate in modo abortivo

• Il sistema tumorale Ad12-criceto è stato riconosciuto all'epoca come un potente modello per studiare le interazioni delle cellule ospiti Ad12. Ad12 infetta in modo abortivo le cellule di criceto con un blocco completo della replicazione del DNA virale e una scarsità di genomi virali che raggiungono i nuclei delle cellule ( Doerfler, 1969 ; Zock e Doerfler, 1990 , 1995 ; Hochstein et al., 2008]. Pertanto, a causa di ciò blocco nella replicazione del DNA virale e nell'espressione genica tardiva, Ad12 non era in grado di replicarsi nelle cellule di criceto, il che soddisfaceva una condizione essenziale per l' integrazione del DNA viralee tumorigenesi. In una serie di esperimenti modello [Doerfler, 1968, 1970], cellule di criceto con DNA cellulare pre-marcato con 5-bromodeoxuridina (5-BU) sono state infettate con enormi inoculi di virus Ad12 marcato con 3 H-timidina-DNA. Mediante centrifugazione in gradiente di densità galleggiante in equilibrio con CsCl alcalino (pH >13) , il DNA leggero di Ad12 e il DNA cellulare pesante marcato con 5-BU potrebbero essere separati fisicamente. A partire da circa 12 ore dopo l'infezione, 3Ad12 marcato con H-timidina-DNA ha iniziato a spostarsi dalla posizione di densità leggera del DNA di Ad12 alla posizione di DNA cellulare pesante, e progressivamente con il tempo dopo l'infezione. L'autenticità di Ad12 del DNA con spostamento di densità è stata accertata mediante ibridazione DNA-DNA. Inoltre, il trattamento ad ultrasuoni del DNA da cellule di criceto infettate da Ad12 ha interrotto il legame stabile agli alcali (pH 13) tra il DNA di criceto cellulare pesante con 3 H-timidina marcato Ad12 e 5-BU. Il DNA Ad12 marcato con 3 H si è quindi spostato verso o vicino alla posizione di densità virale, indicando che il DNA Ad12 marcato con 3 H è stato rilasciato dal suo legame al DNA cellulare 5-Bu-pesante. Questi risultati sono stati i primi a documentare l'integrazione ricombinatoria tra Ad12 e DNA di cellule di mammifero (Doerfler, 1968 , 1970 ).


3.3 . Cosa succede nelle cellule umane infettate in modo produttivo da adenovirus?

• Sono state studiate le infezioni delle cellule umane con adenovirus di tipo 2 (Ad2) o Ad12. Ci sono prove che il DNA dell'adenovirus umano è in grado di ricombinarsi con il DNA cellulare anche nelle cellule umane infette in modo produttivo, sebbene le vere integrazioni siano difficili da documentare poiché nessuna delle cellule umane infette sopravvive alle infezioni da adenovirus produttive. Una forma di DNA virale a rapida sedimentazione, pH >13 alcali-stabile - presunti ricombinanti tra adenovirus e DNA cellulare - è stata documentata da esperimenti sequenziali di ibridazione DNA-DNA, prima con DNA Ad12 autentico seguito da ibridazione con DNA cellulare umano ( Schick et al. 1976 ).•

Inoltre, nelle cellule umane infettate da Ad12, è stato scoperto un ricombinante simmetrico naturale (SYREC) tra i 2.081 nucleotidi terminali di sinistra del DNA Ad12 e un considerevole palindromo di DNA cellulare, come documentato dalle analisi della sequenza nucleotidica . La presenza del segnale di confezionamento dell'adenovirus nel frammento terminale di DNA Ad12 nella molecola ibrida ha facilitato l'incapsidazione nelle particelle virali. Questa scoperta ha fornito un supporto inequivocabile per la formazione di ricombinanti tra Ad12 e DNA cellulare anche in cellule umane infette in modo produttivo ( Deuring et al., 1981b , Deuring e Doerfler 1983). La struttura del DNA SYREC Ad12 – molecola di DNA palindromo cellulare è servita da guida su come dovevano essere costruite le molecole del vettore di adenovirus senza viscere con carichi utili elevati.•

In altri laboratori, prove da esperimenti di ibridazione in situ hanno dimostrato che il DNA di adenovirus umano persisteva in cellule adenoidi umane cronicamente infette ( Neumann et al. 1987 ). Inoltre, in linee cellulari di linfociti umani infettati da adenovirus latente , persistevano anche i genomi di adenovirus ( Zhang et al. 2010 ). Tuttavia, in nessuno dei due sistemi è stato ulteriormente studiato lo stato molecolare dei genomi virali persistenti.


3.4 . Il DNA Ad12 integrato diventa de novo CpG metilato - correlazioni inverse tra i livelli di metilazione del DNA Ad12 e le attività genetiche dei geni virali

• Nelle cellule tumorali di criceto indotte da Ad12 e nelle cellule di criceto trasformate da Ad2 o Ad12, il DNA virale integrato diventa de novo CpG-metilato in modelli specifici ( Sutter et al. 1978 ) che tendono a diffondersi attraverso l'integrazione virale in modo specifico ( Toth et al. 1989 ). La dimostrazione di correlazioni inverse tra livelli di metilazione del DNA e attività genetiche di specifiche regioni dei genomi integrati Ad2 o Ad12 è stata tra le prime in letteratura e ha segnato l'inizio di un impegno a lungo termine della nostra ricerca per chiarire le funzioni biologiche di CpG metilazione del DNA in cellule di mammifero ( Sutter e Doerfler, 1980 ; Vardimon et al. 1980 ;Doerfler, 1983 ). Questa interrelazione inversa tra silenziamento genetico e modelli specifici di metilazione del promotore CpG è stata successivamente confermata in molti sistemi eucariotici di importanza generale.

3.5 . La metilazione del promotore porta al silenziamento del promotore

• In una serie di esperimenti con diversi promotori eucariotici e geni indicatori, abbiamo documentato che la metilazione del promotore specifico ha causato l'inattivazione di questi promotori ( Vardimon et al. 1982 ; Kruczek e Doerfler, 1983 ; Langner et al. 1984 ). Inoltre, specifici pattern di metilazione di CpG nei genomi dei mammiferi possono essere interpretati come segnali per l'inattivazione a lungo termine del gene ( Doerfler, 1983 ; 2006 ). Una descrizione più dettagliata di questa ricerca non verrà presentata qui, perché trasgredirebbe lo scopo di questa recensione.


3.6 . Conseguenze dell'integrazione di DNA estraneo per genomi cellulari

• È stato spesso sostenuto che l'integrazione di DNA estraneo nei genomi dell'ospite potrebbe portare alla distruzione dei geni nel cromosoma ospite e quindi potrebbero verificarsi mutazioni. Indubbiamente, questa è una possibilità che è stata effettivamente descritta in alcuni casi. Tuttavia, considerando che il genoma umano trasporta l'1,1% di esoni, il 24% di introni e il 75% di DNA intergenico ( Venter et al. 2001 ), l'integrazione di DNA estraneo ha una probabilità di circa 1/100 di colpire geni funzionali. Al contrario, nelle nostre analisi delle conseguenze dell'inserimento di DNA estraneo, abbiamo posto l'accento sul ruolo degli effetti epigenetici che coinvolgono siti sia vicini che lontani dal locus di integrazione (vedi sotto). Questo aspetto delle sequeledell'integrazione del DNA estraneo è stato oggetto di precedenti lavori del nostro laboratorio ( Heller et al, 1995 ; Weber et a., 2015 , 2016 ; Doerfler et al, 2018 ).•

Nei siti di inserimento del DNA virale, il livello di metilazione del DNA CpG nel DNA cellulare adiacente è diminuito. Quindi l'integrazione del DNA estraneo è stata in grado di alterare i segnali epigenetici del DNA cellulare in cis , immediatamente nel sito di inserzione ( Lichtenberg et al. 1988 ).•

Ma alterazioni possono verificarsi anche in trans . Nelle cellule di criceto trasformate in Ad12 che trasportano da 10 a 12 copie di DNA virale integrato genomicamente in un sito cromosomico [verde in Fig. 1 A, evidenziato da una freccia bianca], i livelli di metilazione CpG nelle circa 900 copie di intracitoplasma cellulare A Il DNA retrotrasposonico delle particelle (IAP) [rosa in Fig. 1 A ] era notevolmente aumentato rispetto alle cellule di criceto non trasformate e alle cellule di criceto infettate da Ad12 ( Fig. 1 B ; Heller et al. 1995). A causa dell'aumento dei livelli di metilazione del DNA CpG nelle sequenze IAP, il loro DNA si è dimostrato resistente alla scissione con endonucleasi di restrizione sensibili alla metilazione come HpaII e HhaI e non è riuscito a migrare nell'analisi elettroforetica dei prodotti di scissione ( Fig. 1 B ). Le sequenze IAP sono distribuite su molti cromosomi e sono frequentemente localizzate sui loro bracci corti [segnali rosa in Fig. 1 A]. Questa scoperta di un effetto trans della metilazione del DNA CpG nelle cellule di criceto transgeniche per il DNA Ad12 ci ha spinto a indagini pre-progettate sulle conseguenze delle inserzioni di DNA estraneo nelle cellule umane (vedi sotto) •

È importante sottolineare che negli esperimenti descritti in Fig. 1 B, l'effetto transgenomico sui profili di metilazione IAP CpG non dipendeva dalla continua presenza dei transgenomi Ad12 ma persisteva nella linea cellulare TR3, sebbene avesse perso tutti i precedenti genomi Ad12 integrati ( Fig. 1 B; Heller et al. 1995 ). Quindi non si può sostenere che la mancanza di trovare genomi di adenovirus, ad esempio in cellule tumorali umane o cellule in individui con malattie croniche, implicherebbe necessariamente che l'integrazione del DNA dell'adenovirus o quella di qualsiasi altro DNA estraneo non avesse giocato un ruolo importante nella patogenesi di queste malattie. La persistenza del DNA transgenomico non è una precondizione necessaria per il mantenimento del trans effetti, ad esempio qui dello stato trasformato dei genomi e delle cellule riceventi [meccanismo mordi e fuggi].•

Per ulteriori indagini sugli effetti trans epigenetici nelle cellule umane transgenomiche, è stata avviata la seguente serie di esperimenti pilota. In linee clonali di cellule umane transgenomiche per un plasmide batterico di 5,6 kbp, i modelli di trascrizione e metilazione di CpG sono stati confrontati tra cloni cellulari transgenomici e non transgenomiciutilizzando sistemi di microarray di chip genici. Nel 4,7% dei 28.869 segmenti genici analizzati, le attività trascrizionali sono state regolate in modo differenziato verso l'alto o verso il basso nei cloni transgenomici. La profilazione dell'intero genoma ha dimostrato una metilazione differenziale in 3791 di > 480.000 siti CpG che sono stati esaminati in cloni cellulari transgenomici rispetto a quelli non transgenomici. Questi dati hanno indicato che l'inserimento di DNA estraneo in un genoma umano stabilito può alterare notevolmente la metilazione del DNA CpG cellulare ei profili di trascrizione. In effetti, sembravano essersi evoluti diversi tipi di cellule ( Weber et al. 2015 ; Doerfler et al. 2018). Consideriamo questi effetti epigenetici dell'inserimento di DNA estraneo di grande importanza poiché riguardano la stabilità epigenetica e la funzione dell'intero genoma (umano). Poiché molti approcci sperimentali in biologia e medicina ricorrono allo studio di cellule o organismi transgenomici, gli effetti epigenetici spesso insospettati sulla scia dell'inserimento di DNA estraneo dovranno essere presi in considerazione in un'interpretazione realistica dei dati sperimentali.•

L' effetto trans sopra descritto sembrava essere specifico, in quanto non influenzava tutte le parti del genoma umano. I profili di metilazione nelle sequenze retrovirali umane endogene (HERV), che costituiscono circa l'8% del genoma umano, sono rimasti inalterati negli stessi cloni cellulari ( Weber et al. 2016 ) che hanno rivelato cambiamenti di metilazione distinti in altre parti dei loro genomi ( Weber et al. .2015 ). I modelli di metilazione del DNA dell'HERV nelle cellule transgeniche e di controllo esposte agli stessi protocolli sperimentali erano quasi identici ( Weber et al. 2016 ).•

Estendendo gli studi sul ruolo del DNA estraneo nell'ambiente, abbiamo esplorato il destino del DNA estraneo isolato che era stato somministrato a topi di laboratorio. Il DNA estraneo ingerito dal cibo costituisce probabilmente l'incontro più abbondante e regolare di organi umani con DNA estraneo. Batteriofago M13 DNA, la proteina fluorescente verde clonata con plasmide(GFP) o il gene codificato dal DNA nucleare specifico per la pianta per la ribulosio-1, 5-bisfosfato carbossilasi (Rubisco) sono stati somministrati per via orale a topi in un gran numero di esperimenti diversi. Circa l'1% del DNA alimentato è sopravvissuto al passaggio attraverso il tratto gastrointestinale murino in forma frammentata e potrebbe essere rintracciato in quantità ancora inferiori a diversi sistemi di organi, in particolare la milza e il fegato degli animali. In un esperimento, è stato possibile dimostrare che il DNA di prova recuperato dalle cellule della milza era collegato a un segmento di DNA di 80 nt con un'omologia del 70% con il gene del recettore delle IgE di topo ( Schubbert et al. 1997). La linea germinale dei topi sembrava essere protetta dall'invasione del DNA ingerito dal cibo [ (Hohlweg e Doerfler, 2001)]. Quindi sembra probabile che l'esposizione al DNA ingerito dal cibo sia una sfida continua alla stabilità del genoma nelle cellule stocasticamente coinvolte dell'organismo dei mammiferi. Non abbiamo informazioni su questo problema negli esseri umani.


3.7 . Integrazione del vettore adenovirus DNA

• Il laboratorio di Stefan Kochanek presso l'Università di Ulm in Germania ha condotto uno studio pilota per indagare se il DNA del vettore di adenovirus potesse integrarsi cromosomicamente a seguito del trasferimento genico mediato dal vettore di adenovirus nei topi [Stephen et al. 2010]. I vettori di adenovirus carenti di replicazione che trasportano diversi transgeni sono stati iniettati per via endovenosa nei topi. Negli epatociti che esprimono il transgene, sono stati trovati costrutti vettoriali integrati nel genoma del topo. Le analisi dei siti di giunzione tra il vettore e il DNA cellulare hanno rivelato un legame covalente dei terminali del vettore al DNA cellulare del topo mediante ricombinazione eterologa a una frequenza di 6,7 × 10 -5 epatociti trasdotti. Ricombinanti omologhi sono stati identificati a frequenze cento volte inferiori ( Stephen et al. 2010). Nella valutazione di questi risultati gli autori hanno suggerito che la frequenza della ricombinazione del DNA del vettore adenovirale eterologo con il genoma ricevente fosse paragonabile a quella delle mutazioni spontanee nelle cellule di mammifero. Naturalmente, è una questione aperta quali fattori suscitino "mutazioni spontanee". Tra le altre cause, la ricombinazione del DNA umano con DNA estraneo potrebbe svolgere un ruolo importante nella generazione di mutazioni spontanee. Infine, la quantità di DNA vettore di adenovirus confezionato nel virione che viene abitualmente somministrato per via intramuscolare, ad esempio con il vaccino AstraZeneca (50x10 9virioni per dose di vaccino, equivalente a circa 2,5 µg di DNA vettore di adenovirus per dose), è inferiore a quello di molti regimi di terapia genica. Per i dettagli vedere [https://assets.publishing.service.gov.uk/government/uploads/system/uploads/attachment_data/file/963928/UKPAR_COVID_19_Vaccine_AstraZeneca_23.02.2021.pdf].


3.8 . SARS-CoV-2 RNA retrotrascritto e integrato nel genoma?

Motivato dai rapporti sulla diffusione prolungata dell'RNA SARS-CoV-2 e sui continui test RT-PCR positivi tra i sopravvissuti a Covid-19, Zhang et al. ha studiato se l'RNA di SARS-CoV-2 potesse essere retrotrascritto in DNA che a sua volta potrebbe integrarsi nel genoma dell'ospite e continuare a essere trascritto nell'RNA ( Zhang et al., 2021 ). Mediante analisi della sequenza nucleotidica, gli autori hanno osservato copie di DNA SARS-CoV-2 nei genomi di circa il 10-20% dei pazienti Covid-19. Questo DNA SARS-CoV-2 era affiancato da duplicazioni del sito bersaglio e endonucleasi LINE-1 di consensosequenze di riconoscimento Queste ultime due caratteristiche non sono state sempre osservate. Quindi erano concepibili anche meccanismi indipendenti da LINE-1 per l'integrazione del DNA di SARS-CoV-2. È stato sottolineato che sono state trovate integrate solo parti subgenomiche del DNA di SARS-CoV-2. Questo tipo di integrazione preclude la possibilità che il virus infettivo venga prodotto da coloro che trasportano DNA virale SARS-CoV-2 frammentato. Le parti integrate del DNA di SARS-CoV-2 sono state frequentemente trascritte. Gli autori hanno concluso che l'infezione da SARS-CoV-2 potrebbe portare alla sintesi di trascrittasi inversa codificate da retrotrasposone LINE-1 endogene. Questi enzimi hanno generato retrotrascrizioni del DNA. Forse solo frammenti di questo DNA sono stati inseriti nei genomi umani e trascritti nell'RNA SARS-CoV-2. Questa scoperta potrebbe avere implicazioni nel contesto delle sequele a lungo termine delle infezioni da SARS-CoV-2 per i genomi dei pazienti Covid-19. Inoltre, i vaccini a base di RNA, secondo quanto riferito, impiegati con successo in tutto il mondo dovranno essere esaminati anche in questo senso. Reperti imprevisti come quelli qui descritti dovranno essere riprodotti da altri. Probabilmente, i risultati qui descritti stimoleranno le indagini su meccanismi simili che influenzano ulteriori patogeni virali a RNA ( Zhang et al., 2021 ).

3.9 . Commenti sul vettore adenovirus scimpanzé utilizzato nel vaccino AstraZeneca SARS-CoV-2 ChAdOx1

I dettagli sulla struttura e sulla trascrizione della spina dorsale virale del vettore adenovirus dello scimpanzé che è stato utilizzato nella progettazione del vaccino AstraZeneca SARS-CoV-2 ChAdOx1, sono stati recentemente pubblicati ( Almuqrin et al. 2021 ). In questo vettore, una parte non specificata della regione E1 del genoma adenovirale è stata sostituita dalla sequenza codificante della proteina spike SARS-CoV-2. Quindi il costrutto vettoriale è difettoso nella replicazione. L'espressione della glicoproteina spike SARS-CoV-2 nel costrutto vettoriale è stata posta sotto il controllo del promotore CMV [citomegalovirus] sensibile a Tet ( Loew et al. 2010 ), uno dei forti promotori eucariotici. Il vettore, tuttavia, trasporta ancora 28 kbp in particolare dei geni degli adenovirus tardivi degli scimpanzé (Almuqrin et al. 2021). La loro attività trascrizionale potrebbe essere ancora sotto il controllo remoto dei segmenti della regione E1 che probabilmente sono rimasti nel costrutto. A seconda della linea cellulare umana che è stata infettata dal controllo con il vettore, sono stati trovati geni della spina dorsale virale adenovirale espressi a diversi livelli. Al momento non è noto quali geni dell'adenovirus dello scimpanzé siano effettivamente espressi nei vaccinati umani e come i profili di espressione adenovirale varino tra i diversi destinatari del vaccino. Finora, il contributo causale dei prodotti del gene tardivo adenovirale agli effetti collaterali del vaccino che sono stati osservati in tutto il mondo, non è stato studiato e non può essere escluso. Quindi, oltre ai possibili problemi a lungo termine derivanti dall'uso di vettori adenovirali dovuti alla loro integrazione e alle sequele epigenetiche (vedi sopra),Almuqrin et al. 2021 ) il cui ruolo nel suscitare pericolosi effetti collaterali nei vaccinati umani non è stato valutato criticamente.

Non sono state presentate informazioni sull'entità e sulla natura dell'espressione del gene adenovirale ChAdOx1 nei vaccinati umani. In assenza delle funzioni transattivanti della regione ChAdOx1 E1, i transattivatori cellulari negli organismi dei vaccinati potrebbero facilitare l'espressione dei geni virali tardivi ChAdOx1. Le omologie a sequenza breve in questi geni ChAdOx1 con i geni dell'adenovirus umano potrebbero essere sufficienti per suscitare risposte immunitarie di memoria nei vaccinati con forza diversa individualmente. Quest'ultimo potrebbe essere accentuato nei giovani che sono ancora più vicini alle loro esperienze infantili con le infezioni adenovirali umane . Le giovani donne che forniscono la maggior parte dell'assistenza ai pazienti e agli anziani nella società potrebbero quindi essere colpite in modo preferenziale da queste reazioni immunologiche eccessive, quindi questi vaccinati potrebbero essere colpiti più frequentemente da eventi avversireazioni vaccinali . Il motivo per cui i trombociti dovrebbero essere specificamente presi di mira da questo tipo di risposte immunitarie della memoria resta da indagare. In questo contesto sarà d'obbligo ricordare che la trombocitopenia è stata riscontrata anche nei riceventi di costrutti adenovirus-vettoriali nel corso di applicazioni terapeutiche geniche ( Lopez-Gordo et al, 2017 ).

I ricercatori che lavorano sui vettori adenovirali erano a conoscenza dell'incidente di Jesse Gelsinger nel 1999 [ https://en.wikipedia.org/wiki/Jesse_Gelsinger ]. 
A quel tempo, un maschio di 18 anni che soffriva di una malattia metabolica genetica legata all'X , deficit di ornitina transcarbamilasidel fegato, è stato il primo destinatario di un regime terapeutico genico basato sul vettore adenovirale ed è morto pochi giorni dopo l'applicazione dell'adenovirus ricombinante. I possibili fattori coinvolti nell'esito fatale sono stati studiati al momento, ma non è stato possibile identificare chiaramente. L'incidente ha interrotto per lungo tempo l'uso di vettori di adenovirus nella terapia genica. Molto recentemente, un'indagine dettagliata, apparentemente continua, su questo incidente fatale lo ha attribuito alla generazione di complessi adenovirus-anticorpo che hanno contribuito all'"infiammazione sistemica letale" nell'organismo del ricevente ( Somanathan et al. 2020 ). Naturalmente, l' adenovirus umano di tipo 5Il vettore (Ad5) che è stato impiegato nella misura terapeutica genica del 1999 non può essere direttamente confrontato con il vettore di adenovirus dello scimpanzé utilizzato nel vaccino SARS-CoV-2 nel 2021. I vettori derivati ​​da Ad5 sono, tuttavia, parte di altri SARS-CoV-2 vaccini. Pertanto, occorre ancora prestare estrema cautela quando si iniettano vettori adenovirali nell'uomo. Si spera che le esperienze catastrofiche del passato non riemergano con i vettori di oggi che, tuttavia, non sono poi così diversi da quelli problematici più vecchi. A lungo termine e dopo una più attenta considerazione, i vaccini convenzionali basati sulla proteina spike ricombinante avrebbero potuto essere una scelta più sicura.

4 . Conclusioni

La vita si è sviluppata in un DNA, molto probabilmente preceduto da un RNA, mondo. Viviamo tutti in questo mondo del DNA a partire dai nostri cortili quando scaviamo la terra con innumerevoli microrganismi e il loro DNA sepolto in detriti secolari di resti di animali e piante in decomposizione. Basta considerare il fogliame versato ogni anno . Con la nostra alimentazione quotidiana assumiamo DNA estraneo in enormi quantità che non viene momentaneamente digerito in mononucleotidi ma persiste transitoriamente sotto forma di frammenti che sono in grado di entrare nell'organismo umano e distribuirsi in diversi sistemi di organi umani. Il DNA è una molecola molto stabile. In minuscole schegge di ossa di individui della popolazione di Neanderthal di circa 50.000 anni fa, frammenti di DNA di Neanderthalhanno persistito fino ad oggi. Nei campioni di osso scavati di Neanderthal, che Svante Pääbo e i suoi colleghi hanno studiato, il DNA di Neanderthal rappresentava solo circa lo 0,5% del DNA dei campioni ossei che hanno analizzato ( Prüfer et al. 2017 ). Quando si è presentata l'occasione, il DNA estraneo e la sua capacità di sopravvivere e ricombinarsi con il DNA di organismi viventi, potrebbero aver svolto un ruolo importante nell'evoluzione. Mentre stiamo lottando con la pandemia di Covid-19 sul pianeta Terra, il rover Perseverance sta scavando alla ricerca di tracce di decadimento organico sul pianeta Marte.

Questa breve recensione è stata presentata qui per facilitare una discussione indipendente e più equilibrata sui potenziali rischi dovuti alla presenza di DNA vettore adenovirus (AstraZeneca, Johnson & Johnson, Sputnik V e altri) o RNA SARS-CoV-2 (BioNTech/Pfizer, Moderna) nei vaccini che dovrebbero proteggere dal Covid-19. Naturalmente, iniezioni di vaccini basati su vettori nel muscolo deltoide umanoè una questione diversa dai rari eventi casuali che portano a eventi di ricombinazione tra DNA estraneo e umano in sistemi sperimentali come descritto sopra. Inoltre, al momento non è possibile valutare realisticamente né il tipo né la frequenza delle conseguenze di eventi di integrazione di vettori rari. Al contrario, i risultati recentemente pubblicati sui benefici della protezione contro il Covid-19 offerti dai vaccini BioNTech/Pfizer sono incoraggianti ( Dagan et al. 2021 ). Certo, la giuria non ha ancora capito fino a che punto uno qualsiasi dei vaccini proteggerà dalle nuove varianti SARS-CoV-2 più pericolose provenienti da Regno Unito, Sudafrica, Brasile, India (ora denominate rispettivamente α, β, γ, δ). ) o contro varianti sconosciute che potrebbero sorgere in futuro dati i livelli scarsamente controllati di replicazione virale in tutto il mondo (Weber et al., 2021 ). Infine, ignoriamo la protezione vaccinale contro lo sviluppo di sintomi prolungati e ad insorgenza tardiva di Covid-19.

Le informazioni presentate in questa recensione aiuteranno i futuri vaccinati a valutare una valutazione del rischio rispetto al beneficio, vale a dire gli eventi di integrazione del vettore adenovirus o del DNA della trascrizione inversa dell'RNA SARS-CoV-2 a bassa frequenza rispetto, si spera, all'elevata efficacia e protezione del vaccino. Inoltre, poiché l'infezione da SARS-CoV-2 di per sé può essere associata all'integrazione di trascrizioni inverse dell'RNA virale ( Zhang et al., 2021 ), questa serie di eventi potrebbe diventare inevitabile in qualsiasi infezione da SARS-CoV-2. Infine, la misura in cui i prodotti del gene adenovirale potrebbero essere co-espressi con la glicoproteina spike SARS-CoV-2 dopo l'iniezione del vaccino vettoriale nei muscoli deltoidi umani rimane non indagato. Al momento non possiamo misurarne i possibili effetti sull'organismo umano, se effettivamente espressi. Opportunità e rischi, allo stesso tempo, rimangono al di là delle nostre aspettative di controlli assoluti perché la vita e l'evoluzione probabilmente sono state influenzate da "meccanismi casuali" fin dall'inizio. Osservazioni cliniche su risultati di test RT-PCR positivi di lunga durata che implicano l'integrazione del DNA di SARS-CoV-2nel genoma umano nel corso di alcuni casi di Covid-19, rendono irrealistiche le apprensioni sugli eventi di integrazione associati al vaccino, rispetto ai benefici sperati dalla vaccinazione contro il Covid-19. La popolazione umana del 2021 affronta una crisi biomedica di dimensioni senza precedenti, negli ultimi tempi, e dovrà accettare le migliori contromisure attualmente disponibili contro il Covid-19 – Vaccinazioni.

4.1 . Nota aggiunta nella revisione

Al culmine di una pandemia senza precedenti, il rapido sviluppo di efficaci vaccini SARS-CoV-2 è stato accolto con sollievo e ammirazione per la scienza sperimentale ( Sahin et al., 2021 ). Tuttavia, dal punto di vista medico si dimostrerà convincente considerare possibili sequele di iniezioni di vaccini in miliardi di esseri umani. Secondo quanto riferito, una dose da 0,5 ml di adenovirus ricombinante ChAdOx1-S di AstraZeneca contiene 5 × 10 10 particelle di adenovirus 26 di scimpanzé (Ad26) ( https://assets.publishing.service.gov.uk/government/uploads/system/uploads/attachment_data /file/963928/UKPAR_COVID_19_Vaccine_AstraZeneca_23.02.2021.pdf ) che trasportano un equivalente di circa 2,5 µg di DNA ricombinante di scimpanzé Ad26. Le particelle di adenovirus sono probabilmente assorbite dalle cellule delsistema linfatico e il fegato, e il loro DNA sarà trasportato ai nuclei delle cellule. In questa recensione, sono state presentate le prove per l'inserimento del DNA di adenovirus nei genomi del ricevente e le sue conseguenze.(io)

I vaccini basati su vettori di adenovirus possono portare all'integrazione del DNA di adenovirus a frequenza sconosciuta e con conseguenze epigenetiche imprevedibili . È concepibile che gli effetti epigenetici possano essere notati solo anni dopo la vaccinazione.(ii)

I geni adenovirali ancora presenti nel DNA del vettore dell'adenovirus potrebbero essere transattivati ​​da fattori cellulari e portare a reazioni di memoria immunitaria variabili individualmente che sono vissute dai vaccinati come sintomi transitori post-vaccinazione. Gli esiti fatali dovuti a reazioni immunitarie estreme sono stati fortunatamente eventi molto rari.(iii)

SARS-CoV-2 RNA o segmenti di esso, come il gene spike, può essere trascritto inverso LINE-1-codificati inversa trascrittasi o di altri fattori, e il DNA così sintetizzato può diventare integrato a frequenze e luoghi sconosciuti nei genomi vaccinati . Naturalmente, lo stesso vale per tutte le infezioni da SARS-CoV-2. Quindi, il rischio di eventi di integrazione indesiderati delle trascrizioni inverse dell'RNA SARS-CoV-2 in caso di infezioni da SARS-CoV-2 sembra simile a quello della vaccinazione con il vaccino Covid-19 a base di mRNA.


Questi meccanismi della biologia di base devono essere considerati nel contesto dei programmi di vaccinazione di massa degli esseri umani in tutto il mondo. Se e come questi meccanismi giocheranno un ruolo predominante in medicina in futuro dovranno essere seguite da meta-analisi critiche. Al momento non esiste una valida alternativa alla vaccinazione di miliardi di esseri umani. La popolazione umana attualmente partecipa all'esposizione al DNA estraneo in un enorme esperimento. Dopo il completamento delle vaccinazioni in tutto il mondo, dovrebbe essere istituito un programma sentinella post-vaccinazione per monitorare l'esacerbazione di disturbi umani inaspettati, forse nuovi, negli individui vaccinati.
Dichiarazione di interesse concorrente

L'autore non dichiara conflitto di interessi.

Ringraziamenti

Ringrazio Rudolf Jaenisch, Whitehead Institute for Biomedical Research , Cambridge, MA, USA, per aver realizzato il loro manoscritto Zhang et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 2021, online, disponibile per me prima della pubblicazione. In tempi diversi, la ricerca nel laboratorio di WD è stata supportata dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft di Bonn-Bad Godesberg (SFB 74 e SFB 274), dal Center for Molecular Medicine Cologne (CMMC, TP13), dalla Fondazione Thyssen di Colonia (Az. 10.07.2.138 più uno stipendio ad A. Naumann Az. 40.12.0.029.), dalla Staedtler Stiftung di Norimberga (WW/eh 01/15), dalla Dr. Robert Pfleger Stiftung di Bamberg e dal continuo supporto di WD's Epigenetics Gruppo presso l'Istituto di Virologia Clinica e Molecolare, Università Friedrich-Alexander, Erlangen-Nürnberg. Le nostre recentissime analisi sui mutanti SARS-CoV-2 ( Weber et al. 2020 , 2021 ), sono state in parte supportate dal Dr. Robert Pfleger Stiftung.



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sabato 25 settembre 2021

La leggenda del Cronovisore , la " macchina del tempoa" nascosta in Vaticano



Grandemedios

Dagli anni sessanta agli anni novanta , Padre Pellegrino Ernetti ha affermato di aver contribuito a creare una macchina del tempo , chiamata Cronovisore, che ha usato per osservare la crocifissione di Gesù Cristo. 


Dalla scomparsa irrisolta di Emanuela Orlandi nel 1983, a una raccolta segreta di documenti nota come Archivio Apostolico , la storia del Vaticano è intrisa di segreti. E di tutti i presunti segreti del Vaticano, nessuno può essere più strano della leggenda del cronovisore.

Si dice che il cronovisore sia un dispositivo che offre all'utente la possibilità di vedere nel tempo. Sebbene l'esistenza di questo dispositivo non sia mai stata provata, un libro del 2002 del sacerdote vaticano, padre François Brune, dice diversamente.

Secondo Brune, il cronovisore è stato sviluppato da padre Marcello Pellegrino Ernetti , un monaco benedettino. Ernetti avrebbe tenuto segreto il dispositivo fino all'inizio degli anni '60, quando si fidò di Brune e gli disse che 12 scienziati, tra cui il famoso fisico Enrico Fermi e l'ex scienziato nazista Wernher von Braun, lo avevano aiutato a costruirlo.

Padre Pellegrino Ernetti, che avrebbe contribuito a costruire il cronovisore, era un monaco benedettino, scienziato ed esorcista.

Fatto di raggi catodici, antenne e metalli che ricevevano segnali luminosi e sonori a tutte le lunghezze d'onda, il cronovisore avrebbe permesso al team di scienziati di documentare eventi passati, inclusa la crocifissione di Gesù Cristo. La macchina, quindi, potrebbe convalidare gli insegnamenti della Bibbia, semplicemente fornendo uno sguardo di prima mano nel passato.

UN VINCITORE DEL PREMIO NOBEL E UN INGEGNERE DELLA NASA HANNO COSTRUITO IL CRONOVISORE?


La risorsa de facto del cronovisore è il libro di Brune del 2002, Le Nouveau Mystère du Vatican . In esso, Brune spiega come ha incontrato padre Ernetti durante una gita in barca sul Canal Grande di Venezia nei primi anni '60. Come Brune, Ernetti era esperto nella storia delle lingue antiche, e favoriva la conversazione naturale. Ma presto, Ernetti ha rivolto il suo discorso verso la scienza.

Enrico Fermi, che avrebbe contribuito a costruire il cronovisore, vinse il Premio Nobel per la Fisica nel 1938.

Brune aveva esposto i molti modi in cui la Bibbia cristiana poteva essere interpretata quando Ernetti gli aveva suggerito di avere accesso alla verità attraverso un dispositivo per viaggiare nel tempo.

Ernetti ha affermato che lui e un gruppo di rinomati scienziati hanno collaborato in una ricerca comune per scoprire il passato . Uno scienziato era Fermi, vincitore del Premio Nobel per la Fisica nel 1938, e un altro era l'ex nazista von Braun, il cui lavoro alla NASA fece sbarcare gli Stati Uniti sulla Luna.

Secondo Ernetti, il dispositivo aveva diverse antenne, tre delle quali erano fatte di metalli "misteriosi" che catturavano le onde luminose e sonore in tutti i loro rispettivi spettri.

Un "cercatore di direzione" sul dispositivo era presumibilmente sintonizzato sull'era specifica che si voleva vedere, mentre uno schermo lo visualizzava e un dispositivo di registrazione catturava il filmato.

Wernher von Braun, scienziato della NASA diventato nazista.

Il cronovisore era quindi più una finestra sul passato che una macchina del tempo.

Ernetti ha detto che funzionava come un televisore, raccogliendo echi di giorni passati che erano "fluttuanti" nello spazio, e ha affermato di aver visto alcune cose incredibili.

IL DISPOSITIVO AVREBBE RIVELATO I MOMENTI PIÙ IMPORTANTI DELLA BIBBIA


Ernetti ha raccontato come ha assistito al discorso di Marco Tulio Cicerone davanti al Senato romano nel 63 aC. 

I suoi gesti, la sua intonazione. Quanto erano potenti! Che voli di oratorio.

Ernetti fece ulteriori affermazioni sempre più audaci come aver osservato la crocifissione di Gesù Cristo.


Piani presunti del cronovisore.

Dalla fondazione dell'Impero Romano alla distruzione di Sodoma e Gomorra, Ernetti ha affermato che lui e la sua squadra avevano dato un'occhiata ad alcuni degli eventi più importanti della Bibbia.

Il 2 maggio 1972 un settimanale italiano chiamato La Domenica del Corriere pubblicò un articolo intitolato "Finalmente è stata inventata una macchina che fotografa il passato".

Uno dei tanti articoli che documentano le affermazioni di Ernetti.

Insieme alle affermazioni sicuramente dubbie, la rivista ha pubblicato una presunta fotografia del cronovisore che, secondo Ernetti, ha catturato i romani che crocifissero Gesù Cristo. L'articolo del 1972 riportava anche che Ernetti aveva assistito all'Ultima Cena e che una fotografia dell'evento biblico era stata conservata come ricordo.

IL CRONOVISORE, UN ALTRO MISTERO VATICANO


Ernetti ha sostenuto fino alla sua morte nel 1994 che la macchina era stata nascosta dal Vaticano per evitare che cadesse nelle mani sbagliate. È interessante notare che il Vaticano ha decretato nel 1988 che "chiunque usa uno strumento del genere sarebbe scomunicato".

Poco prima di morire, Ernetti scrisse una lettera aperta ribadendo categoricamente che il dispositivo era reale. Affermo che:


Papa Pio XII ci ha proibito di rivelare dettagli su questo dispositivo perché la macchina era molto pericolosa. Può limitare la libertà dell'uomo.

Per quanto allettante possa sembrare il cronovisore, molte delle affermazioni di Ernetti in materia sono state da allora screditate . Gli scettici hanno sostenuto che la sua presunta fotografia di Gesù fosse semplicemente una riproduzione a buon mercato di una statua situata in una chiesa umbra. Un'altra rivista sosteneva che la foto fosse semplicemente un'immagine capovolta di Gesù da una cartolina fatta nella città italiana di Collevalenza.

La presunta foto di Gesù (a sinistra) e un dipinto curiosamente simile (a destra) creato molto prima che Ernetti pubblicasse questa immagine.

Nel 1996, la rivista Paracelsus ha emesso ulteriori critiche alle affermazioni di Ernetti. L'articolo chiedeva perché Ernetti non avesse pubblicato istruzioni dettagliate su come costruire il dispositivo per legittimare le sue affermazioni. Inoltre, l'articolo ha rivelato come il design del cronovisore assomigliasse molto a un dispositivo simile di
un romanzo di fantascienza del 1947.

Brune è morto nel 2019 e credeva nel cronovisore.

Alcuni dicono che padre Pellegrino Ernetti abbia confessato di aver inventato l'intera storia prima della sua morte, avvenuta l'8 aprile 1994, ma questo rimane molto controverso. Con von Braun, Fermi, Ernetti e Brune morti, rimane solo il ricordo di un'intrigante mistero.

venerdì 24 settembre 2021

Viganò Chiarisce: la Vittima non Ha Colpe.



Maurizio Blondet 

Siero come Battesimo Satanico? Viganò Chiarisce: la Vittima non Ha Colpe.

Eccellenza, non trova che affermare che la vaccinazione rappresenta una sorta di battesimo satanico possa suonare un po’ forte per tanti Cattolici che si sono lasciati convincere, in buona fede, a ricevere il vaccino?

 

La ringrazio di avermi fatto questa domanda, che mi permette di precisare il mio pensiero e di rincuorare quei fedeli che, per varie ragioni, si sono fatti vaccinare.

La mia affermazione sulla simbologia satanica del vaccino e sul fatto che possa rappresentare un “marchio della Bestia” riguarda le intenzioni di chi ha deciso di creare una pandemia per poterla usare dolosamente come pretesto per il compimento del Great Reset in preparazione dell’instaurazione del Nuovo Ordine Mondiale. È l’élite luciferina a dare questa connotazione quasi esoterica al vaccino, così come attribuisce tratti rituali e liturgici all’intera pandemia. La mia vuol essere un’iperbole, volta a mettere in luce gli aspetti più inquietanti dell’intera farsa pandemica.

Viceversa, il semplice fedele che, anche su consiglio del proprio parroco o del direttore spirituale, o sotto la pressione dei media e delle istituzioni sanitarie, si lascia convincere all’inoculazione non ha alcuna colpa, né gli si può attribuire la responsabilità gravissima di volere, con quel vaccino, apostatare la Fede cattolica e farsi marchiare con il “marchio della Bestia”. Va inoltre ricordato che – come è avvenuto anche per persone che conosco e per alcuni miei parenti – la somministrazione del siero genico è stata spesso imposta con il ricatto o con la coercizione, condizionando le persone a poter fruire di certi servizi, a poter accedere in determinati luoghi o addirittura – come accade oggi in Italia – a poter lavorare solo se si è in possesso del passaporto sanitario e se si è ricevuto il cosiddetto vaccino. Anche molti sacerdoti, per poter esercitare il loro Ministero e poter accedere alle strutture ospedaliere o alle case di ricovero per amministrare i Sacramenti, sono stati costretti a vaccinarsi, spesso su ordine del loro Vescovo.

Sconcerta che la Congregazione per la Dottrina della Fede si sia prestata a far da cassa di risonanza alla deep church e al suo capo, in un momento in cui sarebbe invece stato necessario e doveroso un intervento chiarificatore preciso e inequivocabile. Invece vediamo con quale fretta la CDF si sia precipitata a dare legittimazione morale a dei farmaci sperimentali senza nemmeno conoscerne i componenti, dal momento che essi sono coperti dal segreto industriale; con quale disinvoltura si sia dichiarato moralmente accettabile l’uso di linee cellulari derivanti da aborti, distorcendo l’insegnamento cattolico col solo scopo di compiacere a Bergoglio e alla narrazione pandemica. «Molte eresie morali del nostro tempo contengono anche citazioni di san Tommaso e di altri Dottori della Chiesa», ha giustamente osservato mons. Athanasius Schneider in un suo recente intervento (qui). Questa fretta – in perfetta sincronia con il clima di emergenza che ha legittimato anche nelle autorità civili scelte sciagurate, sotto la pressione dell’industria farmaceutica – ha fatto sì che la Nota della Congregazione si mostri omissoria e incompleta, perché non tiene conto degli effetti collaterali gravi del siero genico, a breve e a lungo termine. La Congregazione tace degli aborti indotti alle madri incinte, aumentati in modo esorbitante; tace del rischio di sterilità indotto dal siero; tace delle patologie gravi e dei decessi che esso provoca nei bambini e nei giovani, che pure sono i meno esposti al rischio di ospedalizzazione per Covid. Infine, la nuova tecnologia mRNA utilizzata per la prima volta dai sieri disponibili fa sì che non si possa parlare propriamente di “vaccini”, ma di farmaci o di terapie, peraltro palesemente dannosi e inefficaci; e nessuno può dire quali saranno le modificazioni a livello genetico provocate dall’inoculazione della proteina Spike. La dimostrata inefficacia dei vaccini li priva della liceità inizialmente loro riconosciuta dalla Congregazione, dal momento che il pericolo al quale si sottopone il paziente è sproporzionato rispetto al beneficio – minimo o inesistente – che essi inizialmente avrebbero dovuto assicurare. Nonostante tutti questi argomenti, Bergoglio si è fatto attivo testimonial dei vaccini, dimostrando con questo suo endorsement il legame intrinseco che lega la deep church e il deep state. È necessario che la Congregazione per la Dottrina della Fede, se non vuole perdere totalmente la propria autorevolezza, si pronunci nuovamente, alla luce dei dati ora disponibili e delle evidenze scientifiche ormai riconosciute dalla comunità scientifica, anche se sono censurate dai media.

Le implicazioni del siero genico sono essenzialmente morali, e come tali non possono essere considerate marginali, anche se da esse dipende il normale esercizio delle attività quotidiane delle persone o la possibilità di esercitare il proprio Ministero per i sacerdoti. Afferma il mio confratello mons. Schneider: «Un rifiuto intransigente e inequivocabile di qualsiasi collaborazione con l’industria fetale è analogo al rifiuto intransigente di qualsiasi collaborazione con il culto degli idoli o della statua dell’Imperatore da parte dei Cristiani nei primi secoli». Ma quale intransigenza possiamo aspettarci, quando Bergoglio accusa di rigidità e di integralismo quanti vogliono conservarsi fedeli al Magistero e non perde occasione per dileggiare e insultare chi non accetta le deviazioni che egli impone con odioso autoritarismo?

Vorrei tuttavia ricordare a quanti hanno subito la vaccinazione che, laddove manchi la consapevolezza circa la natura del siero genico sperimentale o dove in buona fede ci si è fidati dell’autorità civile ed ecclesiastica, credo che in nessun modo il singolo fedele debba sentirsi “colpevole” di essersi vaccinato. La dottrina ci insegna infatti che ogni atto compiuto senza piena avvertenza e senza deliberato consenso non può essere considerato moralmente peccaminoso: questo vale anche nel caso specifico dei cosiddetti vaccini.

Rimane la gravissima responsabilità morale di quanti, costituiti in autorità, hanno esercitato pressioni sui loro sudditi – tanto in ambito civile quanto ecclesiastico – per convincerli a sottoporsi alla vaccinazione. Le conseguenze per la salute di ciascuno, ivi compresi i decessi e le menomazioni permanenti, gravano come macigni sulla coscienza delle autorità sanitarie ed ancor più della Gerarchia ecclesiastica, che dovranno rispondere dinanzi a Dio per le colpe proprie e per quelle che hanno fatto commettere ai propri sudditi.

Preghiamo perché il Signore preservi i Suoi figli da quei danni che, con colpevole leggerezza o, peggio, con criminale complicità sono stati provocati a tanti innocenti, i quali si sono fidati dell’autorità e della parola di coloro che sono preposti rispettivamente alla tutela della salute dell’anima e del corpo.



5 EYES I VERTICI ANGLOSASSONI SI PREPARANO TEMPESTIVAMENTE ALLA GUERRA DEI PROSSIMI DECENNI



Antonello Boassa 

I cinque "occhi" si compattano. USA, UK, Canada, Australia, Nuova Zelanda. Anglosassoni contro tutto il pianeta. E' ipotizzabile che i grandi capi della finanza e dell'intelligence, principalmente USA, potranno consentire l'accesso a Paesi altri di lingua inglese: presumibilmente Kenia, Giamaica, Liberia, Sudafrica.

Un gran pastone tutto anglosassone, non esclusivamente bianco ma ricco di tante etnie. Forse potranno essere arruolati per un ventunesimo secolo slang, free, green, smart working, smart loving, anche coloro che lasciando morire la lingua madre in Paesi ostili come Russia e Cina per fare un esempio, abbraccino la lingua inglese, anche se magari un pò sgrammaticati e non usi a studi letterari.

Proprio in questi mesi, USA, UK e Australia hanno puntualizzato accordi non solo sul piano commerciale per isolare l'ex Impero celeste, ma anche e soprattutto sul piano militare. L'indo-pacifico deve essere ben pattugliato e militarizzato contro l'aggressività cinese.
Deve essere scongiurato che il 2049 (celebrazione della rivoluzione vittoriosa di Mao) questa grande distesa possa diventare un lago cinese.



Umiliata la Francia (e con essa l'Unione Europea) che ha ricevuto una disdetta miliardaria dall'Australia che non comprerà più i modernissimi sottomarini nucleari transalpini ma si avvarrà al loro posto della mercanzia made in Usa, per incominciare a cementare la grande alleanza anglosassone.

Al povero Macron sono saltati i nervi. Un'umiliazione. le sue aspirazioni ad un esercito europeo sono diventate ancora più pressanti. Il tradimento della perfida Albione è trasparente. L'Europa riceve una mazzata epocale di cui , tenendo conto della cecità per non dire imbecillità dimostrata, con la pandemia della peste nera, dai ceti dirigenti dell'Unione, forse non ne hanno capito ancora tutta la portata.
L'Europa emarginata dai propositi militareschi delle grandi potenze anti russe, anticinesi.

Risulta evidente che Biden (o chi per lui, Pentagono, Deep state, il team Clinton-Obama...) tenterà di dividere l'Europa in aree più sensibili al richiamo anglosassone, un richiamo che suona dolce alle orecchie dei geneticamente servi del governo/ dei governi dell'Ex Bel Paese che infatti , fin dal 2010, prima del colpo di stato Napolitano/Monti del 2011, aspiravano a far parte della congrega di cui sopra, con ardente cupidigia che anche l'Italia potesse far parte degli "occhi di Dio".

Mai sono sono stati così orgogliose le più alte cariche dello stato militare. Le nostre forze armate sono pronte anche per una guerra catastrofica. Ricevuti grandi apprezzamenti dagli alleati Nato. Non solo presenti in tante missioni di pace allo scopo di dare un sostegno sub-imperiale all'aggressione dei Paesi ostili e al controllo delle risorse altrui. ma anche capaci di disporre di un'industria degli armamenti tra le più avanzate. Due portaerei non sono mica poca cosa. Ed in più un governo ultra-atlantista capeggiato dal più servile dei servi, grande dispensatore di denaro (più di venti miliardi all'anno, cui si aggiungono regalie distolte da spese inutili ( ospedali, istruzione, ambiente...)



Credo che i meriti del "governo" saranno presto riconosciuti, alla faccia della Francia, e presto anche l'Italia farà parte degli "occhi" vigili che controlleranno democrazie, libertà, pace ( certo ci vorrà un guerra perché ci sia la pace che forse questa volta potrebbe essere eterna)


Appello a Unione Comuni e Regione Sardegna del Comitato cittadino per i diritti fondamentali





Ai sindaci Unione dei comuni Alta Gallura

Alla Giunta Regionale Regione Sardegna

Lettera aperta alle istituzioni del comitato cittadino “Comitato per i diritti fondamentali

Sembra di vivere un incubo e di rivivere tempi, anche non troppo lontani, in cui essere una voce “fuori dal coro” costava molto caro sia sul piano personale che sul piano professionale. Non si tratta di fare il bastian contrario a tutti i costi ma di preservare il diritto alla libertà di pensiero e parola anche quando il pensiero e la parola sono scomodi, senza il rischio di venir etichettati e liquidati come “novax”, “nogreenpass”, con una escalation di hate speech che può arrivare all’offesa (vedi l’infelice frase di chi ha definito sorcio chi sceglie, in accordo con la normativa, di non vaccinarsi) passando attraverso le accuse di complottismo o, financo, di filo terrorismo. E di fronte a questa spirale di odio che rischia di degenerare ad ogni piè sospinto, cosa fanno le istituzioni? Con sconforto e sbigottimento, appuriamo che, mediante i canali social, spesso alimentano i tentativi di far passare chi, lo ripetiamo fino allo sfinimento, ha deciso di non vaccinarsi per i motivi più svariati in armonia con le leggi dello

Stato italiano, come infame untore, pericoloso criminale, imbecille
subumano e chi più ne ricorda più ne citi. Assistiamo, con la connivenza delle istituzioni, ad inaccettabili e sistematici tentativi di estromettere dal dibattito pubblico chi desidera esprimere la propria voce fuori dal coro, soppiantato da esperti spesso autoproclamatisi tali senza che a tale condizione sia dato riscontro oggettivo.

A ciò si aggiunga che alla tv ed alla radio compaiono sempre i soliti
commentatori, immancabilmente fautori solo dell’unica narrazione degli eventi autorizzata dalle istituzioni, puntualmente immancabili,
acriticamente ascoltati (non esiste quasi mai o raramente il contraddittorio) e, presumiamo, profumatamente pagati.

Dovere precipuo delle istituzioni è garantire il confronto corretto e leale fra le posizioni in campo, il diritto di replica (questo sconosciuto), difendere la libertà di pensiero e parola e contrastare le parole dell’odio.

Allora perché continuiamo ad assistere a politici che si permettono sui social di offendere e diffondere lo hate speech?

Abbiamo esempi di sindaci che si rallegrano constatando che numerosi
cittadini sono indotti alla vaccinazione dall’insostenibilità del peso
economico di ricorrere ai tamponi per ottenere la certificazione verde.

Assistiamo quotidianamente a primi cittadini che, riempiendosi la bocca della parola libertà, invitano i non vaccinati a rimanersene a casa per non mettere in pericolo gli altri, come se i vaccinati non fossero a sua volta veicolo di contagio o come se i non vaccinati si aggirassero per strada al fine di infettare i loro simili intenzionalmente. Abbiamo ascoltato, fino allo sfinimento, sindaci che invitano i non vaccinati a farsi avanti compiendo un gesto di responsabilità e dunque tacciando coloro che non lo faranno di irresponsabilità.

Siamo qua a chiedere non solo che tutto ciò si arresti ma soprattutto
dimostrazioni concrete da parte della politica e della istituzioni che i
diritti di espressione e libertà di parola valgano ancora qualcosa in questa ricca democrazia occidentale che tanto se ne fa vanto.

Attendiamo risposte.

Davvero siamo nuovamente ripiombati in tempi bui e tristi in cui porsi
domande scomode non è più concesso? È davvero così scandaloso chiedersi se nella gestione dell’emergenza sanitaria in atto non vi siano interessi economici da perseguire? È davvero moralmente riprovevole chiedersi quali convenienze ci siano nella gestione di questo nuovo capitolo dal sapore kafkiano per cui per coprire l’inefficacia dei vaccini si pensa di ricorrere allo spauracchio dell’obbligo vaccinale per tutti? È necessario diventare complottisti ad ogni costo se ci adiriamo e lottiamo contro l’obbligo vaccinale camuffato messo in atto dal governo?

Rimaniamo in attesa di una vostra risposta.

È pur vero che la storia non si ripete mai esattamente identica e che
proporre paragoni storici è pertanto inopportuno e, spesso, teatrale più
che vero giudizio storico ma, davvero, lasciatecelo dire, questi non son
tempi per spiriti critici! È norma di buon senso, ma se qualcuno se ne è
dimenticato, permetteteci di ricordarlo, riconoscere che in ogni scontro, dal più insignificante fino agli scontri di civiltà, non esiste mai chi abbia totalmente torto e chi totalmente ragione. Solo questa riflessione dovrebbe indurre politici ed amministratori a maggior prudenza nella scelta della parole e ad ascoltare i cittadini che esprimono pacificamente il proprio dissenso. E se paragonare la gogna pubblica a cui sono sottoposti quanti esprimono voci fuori dal coro può sembrare un mezzuccio per impietosire e conquistare un poco i riflettori, ci sia dato ricordare che fra giudizio storico ed opinione sensazionalistica spesso il passo è breve, oltre che opportunisticamente conveniente per chi voglia far tacere l’avversario: trasformare il dissenso in criminalità è spesso la via per mettere a tacere chi non è d’accordo con noi.

Ma noi uomini e donne della strada abbiamo compreso quale sia il
giochetto messo in atto: ignorare che esiste chi la pensa diversamente. E per farlo tacere non è necessario ricorrere alle armi o al confino. La
censura si attua in maniera sicuramente meno cruenta che non in tempi
passati ma non per questo meno ignobile: basta spegnere il microfono del nostro interlocutore ed egli rimarrà senza voce. Così che la voce fuori dal coro rimarrà muta.

Avete davvero paura di chi manifesta pacificamente contro misure
ritenute ingiuste e lesive dei diritti costituzionalmente garantiti? Davvero ritenete che chi esercita il dubbio rappresenti il male assoluto tanto da doverlo zittire su tutti i canali di comunicazione?

Il nostro proposito come Comitato è coltivare il dubbio, promuovere lo
spiriti critico, indagare a fondo, e, qualora necessario, contestare le misure adottate nella gestione di questa pandemia, sempre animati dal principio di prudenza e dal desiderio di non prendere nulla per vero. Come risposta la politica lancia messaggi fuorvianti, crea pericolosi terroristi là dove esistono cittadini desiderosi di vederci chiaro, alimenta l’odio e falsi stereotipi come quello del non vaccinato untore, la cui nullità scientifica è sotto gli occhi di tutti.

Avete realmente intenzione di proseguire fomentando odio e spegnendo il microfono di chi dice cose scomode? Vi ricordiamo che è indegno di un governante alimentare le parole dell’odio. Vi ricordiamo che alcuni diritti sono calpestati e che vostro compito è vigilare affinché ciò non avvenga.



Nonostante questa sia follia, c’è ancora del metodo!

Ci sia concessa questa citazione a ricordare che ci piace definirci non già complottisti o pericolosi criminali ma cittadini a cui la scuola, la famiglia e le esperienze di vita hanno insegnato ad esercitare lo spirito critico e se ciò ci espone al rischio di essere etichettati come rivoluzionari, ben venga.

Noi riteniamo che il silenzio cui viene ridotto l’avversario nasconda
qualcosa. E finché troveremo le forze di riattivare quel microfono non
smetteremo di parlare.

Concludendo, chiediamo un confronto leale e concreto sui temi oggi
oggetto di dibattito e fonte di dubbi per molti cittadini. Vogliamo che i
luoghi di cultura siano accessibili. Vogliamo poter tornare a popolare i
teatri, le palestre, i luoghi della socializzazione. Vogliamo che cessino i
pericolosi meccanismi di discriminazione e ghettizzazione. Vogliamo
rispetto e non nomignoli riduttivi volti solo a renderci bersaglio di facili odi o capro espiatorio di misure anticontagio deludenti ed inefficaci.

Il comitato, a nome e per conto di tutti i cittadini che oggi sono
discriminati, chiede azioni concrete da parte di codeste istituzioni. Solo così chi oggi ci amministra può allontanare da sé l’accusa di discriminare parte della cittadinanza costringendola al di fuori della vita collettiva, privata della possibilità di accedere ai luoghi della socializzazione, azione questa che appare ancor più grave, agli occhi di chi scrive, quando a fare le spese di questa politica sorda alle richieste legittime di ascolto sono i giovani.

Il comitato chiede, dunque, con fermezza la possibilità di avere tamponi gratuiti e in subordine farmacie autorizzate all’effettuazione dei tamponi

con conseguente rilascio della certificazione verde a prezzi accessibili. È, infatti, ad oggi impossibile nella zona compresa fra i comuni di Tempio, Bortigiadas, Luras e Calangianus trovare strutture che possano offrire questo esame a prezzi non gonfiati. E questo è inaccettabile. Come è inaccettabile e contrario all’etica professionale che alcuni medici di medicina generale si rifiutino di effettuarli di fatti negando quell’assistenza che sono obbligati a garantire.



Per queste motivazioni appena esposte il COMITATO PER I DIRITTI FONDAMENTALI dice:
“Ridateci la biblioteca, ridateci il teatro e i luoghi di cultura in generale, ridateci la possibilità del confronto, ridateci la nostra voce fuori dal coro, e, non ultimo, chiedeteci scusa per le frasi infamanti pronunciate contro chi esercitava il proprio diritto di parola”.
Tempio Pausania, 22 settembre 2021

I membri del comitato per i Diritti fondamentali.

Il comitato nato recentemente dall’iniziativa di alcuni cittadini di Tempio Pausania opera e collabora con numerose associazione ed altri comitati dell’Alta Gallura. Le sue finalità sono rivolte a garantire a chi risiede nei comuni dell’Alta Gallura assistenza e tutela dei diritti intervenendo presso l'Amministrazione competente e più in generale in ogni ambito della vita sociale vigilando sul rispetto dei diritti. Il Comitato si propone di operare al servizio dei cittadini, in particolare agendo attraverso attività di sensibilizzazione dell’opinione pubblica e di tutti gli Organi Istituzionali che abbiano il potere di intervenire in maniera diretta od indiretta sulla campagna di vaccinazione anti Covid. Il comitato in particolare lotta contro una sorta di “tabù” intorno alla questione della vaccinazione contro il covid 19 e una forte pressione psicologica, ignobilmente alimentata dalle forze politiche 
tutte, per cui chi osa applicare il semplice principio di precauzione e porre dubbi in relazione a casi clinici particolari, rischia di fatto di veder lesa la propria reputazione trattato ed apostrofato comescellerato o pericoloso criminale

martedì 21 settembre 2021

L'incapacità di dimostrare che il virus esiste


L'esposizione a SARS-CoV-2 genera memoria delle cellule T in assenza di un'infezione virale rilevabile






di Jon Rappoport

INCAPACITÀ DI DIMOSTRARE CHE IL VIRUS ESISTE!

Più di un anno fa, ho proposto (insistito su) una procedura per dimostrare l'esistenza di SARS-COV-2.

Questa procedura è essenziale e, inutile dirlo, non è stata eseguita e non sarà mai eseguita.

Come mai? Perché il risultato potrebbe distruggere completamente e completamente la narrativa COVID.

Ecco la procedura: metti in fila 500 persone a cui è stato diagnosticato il COVID-19 e prendi loro campioni di tessuto.

Elabori correttamente questi campioni, tramite centrifugazione, ecc., Al fine di estrarre e arrivare a ciò che ritieni sia il virus.

Metti quel materiale sotto un microscopio elettronico e lo fotografi.

Quindi metti le 500 foto dei 500 "pazienti pandemici" fianco a fianco.

Ti poni tre domande scottanti.

Uno: in ogni foto ci sono molti virus identici?

Due: ci sono questi virus in ognuna delle 500 foto?

Tre: il virus è uno che non hai mai visto prima?

Se la risposta alle domande uno e due è sì, sembra che tu abbia trovato un virus comune per i 500 pazienti. Se la risposta a tre è sì, è un virus mai visto prima.

Se la risposta alla prima o alla seconda domanda è no, non sei riuscito a trovare il virus comune che stai cercando. Non sei riuscito a dimostrare una causa virale per quello che chiami COVID-19.

Se vedi molte particelle di virus identiche in alcune, ma non in tutte, le foto, potresti aver trovato o meno un virus. Per decidere tale questione, sono necessarie tre condizioni: i ricercatori sono onesti e indipendenti; un nuovo team di tali ricercatori ripeterà l'intera procedura, dall'inizio, per vedere se i loro risultati corrispondono a quelli del team originale; e hai bisogno di esperti veramente qualificati per determinare se le particelle nelle foto del microscopio elettronico sono effettivamente virus o qualcos'altro.

Nota: questo è il motivo per cui una o due foto di uno studio non significano NIENTE.

Va bene. Andando avanti, ci sono altri fattori coinvolti nel processo di scoperta di un virus. Questi fattori sono l'ISOLAMENTO e il SEQUENZIAMENTO GENETICO.

Sono entrambi trattati in una dichiarazione sull'isolamento dei virus, scritti e pubblicati dal Dr. Andrew Kaufman, dal Dr. Tom Cowan e da Sally Fallon Morell. Lo riporto qui integralmente:

Dichiarazione sull'isolamento dei virus (SOVI) [1]

“Isolamento: L'azione di isolare; il fatto o la condizione di essere isolati o soli; separazione da altre cose o persone; solitudine.” — Dizionario inglese di Oxford

Continua la polemica sul fatto che il virus SARS-CoV-2 sia mai stato isolato o purificato. Tuttavia, utilizzando la definizione di cui sopra, il buon senso, le leggi della logica e i dettami della scienza, qualsiasi persona imparziale deve giungere alla conclusione che il virus SARS-CoV-2 non è mai stato isolato o purificato. Di conseguenza, non è possibile trovare alcuna conferma dell'esistenza del virus. Le conseguenze logiche, di buon senso e scientifiche di questo fatto sono:

* non è possibile conoscere la struttura e la composizione di qualcosa di cui non è stata dimostrata l'esistenza, inclusa la presenza, la struttura e la funzione di qualsiasi ipotetico picco o altre proteine;

* non si può conoscere la sequenza genetica di qualcosa che non è mai stato trovato;

* non si possono conoscere le “varianti” di qualcosa di cui non è stata dimostrata l'esistenza;

* è impossibile dimostrare che SARS-CoV-2 causi una malattia chiamata Covid-19.

Nel modo più conciso possibile, ecco il modo corretto per isolare, caratterizzare e dimostrare un nuovo virus. In primo luogo, si prelevano campioni (sangue, espettorato, secrezioni) da molte persone (ad es. 500) con sintomi che sono unici e sufficientemente specifici da caratterizzare una malattia. Senza mescolare questi campioni con QUALSIASI tessuto o prodotto che contenga anche materiale genetico, il virologo macera, filtra e ultracentrifuga cioè purifica il campione. Questa comune tecnica di virologia, utilizzata da decenni per isolare i batteriofagi [2a] e i cosiddetti virus giganti in ogni laboratorio di virologia, consente quindi al virologo di dimostrare con la microscopia elettronica migliaia di particelle di dimensioni e forma identiche. Queste particelle sono il virus isolato e purificato.

Queste particelle identiche vengono quindi controllate per l'uniformità mediante tecniche fisiche e/o microscopiche. Una volta determinata la purezza, le particelle possono essere ulteriormente caratterizzate. Ciò includerebbe l'esame della struttura, della morfologia e della composizione chimica delle particelle. Successivamente, il loro corredo genetico è caratterizzato dall'estrazione del materiale genetico direttamente dalle particelle purificate e dall'utilizzo di tecniche di sequenziamento genetico, come il sequenziamento di Sanger, anch'esse in circolazione da decenni. Quindi si fa un'analisi per confermare che queste particelle uniformi sono di origine esogena (esterna) come viene concettualizzato un virus, e non i normali prodotti di degradazione dei tessuti morti e morenti. [2b] (A partire da maggio 2020,

Se siamo arrivati ​​fino a questo punto, abbiamo completamente isolato, caratterizzato e sequenziato geneticamente una particella virale esogena. Tuttavia, dobbiamo ancora dimostrare che è causalmente correlato a una malattia. Questo viene effettuato esponendo un gruppo di soggetti sani (di solito si usano animali) a questo virus isolato e purificato nel modo in cui si pensa si trasmetta la malattia. Se gli animali si ammalano della stessa malattia, come confermato dai risultati clinici e autoptici, si è ora dimostrato che il virus provoca effettivamente una malattia. Ciò dimostra l'infettività e la trasmissione di un agente infettivo.

Nessuno di questi passaggi è stato nemmeno tentato con il virus SARS-CoV-2, né tutti questi passaggi sono stati eseguiti con successo per alcun cosiddetto virus patogeno. La nostra ricerca indica che un singolo studio che mostri questi passaggi non esiste nella letteratura medica.

Invece, dal 1954, i virologi hanno prelevato campioni non purificati da relativamente poche persone, spesso meno di dieci, con una malattia simile. Quindi elaborano minimamente questo campione e inoculano questo campione non purificato su una coltura tissutale contenente di solito da quattro a sei altri tipi di materiale, che contengono tutti materiale genetico identico a quello che viene chiamato "virus". La coltura tissutale viene affamata e avvelenata e si disintegra naturalmente in molti tipi di particelle, alcune delle quali contengono materiale genetico. Contro ogni buon senso, logica, uso della lingua inglese e integrità scientifica, questo processo è chiamato "isolamento del virus". Questa mistura contenente frammenti di materiale genetico da molte fonti viene poi sottoposta ad analisi genetica, che poi crea in un processo di simulazione al computer la presunta sequenza del presunto virus, un cosiddetto genoma in silico. In nessun momento un virus reale viene confermato dalla microscopia elettronica. In nessun momento viene estratto e sequenziato un genoma da un virus reale. Questa è frode scientifica.

L'osservazione che il campione non purificato - inoculato su coltura tissutale insieme ad antibiotici tossici, tessuto fetale bovino, liquido amniotico e altri tessuti - distrugge il tessuto renale su cui è inoculato è data come prova dell'esistenza e della patogenicità del virus. Questa è frode scientifica.

D'ora in poi, quando qualcuno ti darà un documento che suggerisce che il virus SARS-CoV-2 è stato isolato, controlla le sezioni dei metodi. Se i ricercatori hanno usato le cellule Vero o qualsiasi altro metodo di coltura, saprai che il loro processo non è stato l'isolamento. Sentirai le seguenti scuse per il motivo per cui l'effettivo isolamento non viene eseguito:

1. Non c'erano abbastanza particelle di virus da analizzare nei campioni dei pazienti.

2. I virus sono parassiti intracellulari; non possono essere trovati fuori dalla cella in questo modo.

Se il numero 1 è corretto e non riusciamo a trovare il virus nell'espettorato dei malati, allora su quali prove pensiamo che il virus sia pericoloso o addirittura letale? Se il numero 2 è corretto, come si diffonde il virus da persona a persona? Ci viene detto che emerge dalla cellula per infettare gli altri. Allora perché non è possibile trovarlo?

Infine, mettere in discussione queste tecniche e conclusioni di virologia non è una distrazione o un problema che divide. Fare luce su questa verità è essenziale per fermare questa terribile frode che l'umanità sta affrontando. Perché, come ora sappiamo, se il virus non è mai stato isolato, sequenziato o dimostrato di causare malattie, se il virus è immaginario, allora perché indossiamo maschere, distanziamento sociale e mettiamo in prigione il mondo intero?

Infine, se i virus patogeni non esistono, allora cosa sta succedendo in quei dispositivi iniettabili erroneamente chiamati "vaccini", e qual è il loro scopo? Questa domanda scientifica è la più urgente e rilevante del nostro tempo.

Abbiamo ragione. Il virus SARS-CoV2 non esiste.

—fine della dichiarazione di Kaufman, Cowan, Morell



Infine, ecco un repost del mio articolo su una richiesta di isolamento del virus. Il Dr. Kaufman fa un'analisi passo passo di una citazione da uno studio tipico che pretende di descrivere come è stato isolato SARS-CoV-2:

Dott. Andrew Kaufman confuta "l'isolamento" di SARS-Cov-2; fa un'analisi passo passo di una tipica affermazione di isolamento; non ci sono prove che il virus esista...

La comunità medica globale ha affermato che "una pandemia è causata da un virus, SARS-Cov-2".

Ma cosa succede se il virus non esiste?

La gente mi ha chiesto un'analisi passo passo di un'affermazione tradizionale sull'isolamento del virus. Bene, eccolo qui.

"Isolamento" dovrebbe significare che il virus è stato separato da tutto il materiale circostante, quindi i ricercatori possono dire: "Guarda, ce l'abbiamo. Esiste."

Ho preso un passaggio tipico da uno studio pubblicato, una sezione "metodi", in cui i ricercatori descrivono come hanno "isolato il virus". L'ho inviato al Dr. Andrew Kaufman [3], e ha fornito la sua analisi in dettaglio.

Ho trovato diversi studi che usavano un linguaggio molto simile per spiegare come "SARS-CoV-2 fosse isolato". Ad esempio, "Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 from Patient with Coronavirus Disease, United States, (Emerging Infectious Diseases, Vol. 26, No. 6 - June 2020)" [4].

Innanzitutto, voglio fornire un po' di background che aiuterà il lettore a capire cosa sta succedendo nello studio.

I ricercatori stanno creando una zuppa in laboratorio. Questa zuppa contiene una serie di composti. I ricercatori presumono, senza prove, che "il virus" sia in questa zuppa. Non separano mai il presunto virus dal materiale circostante nella zuppa. L'isolamento del virus non si sta verificando.

Hanno iniziato a mostrare che la scimmia (e/o le cellule umane) che hanno messo nella zuppa stanno morendo. QUESTA È LA LORO "PROVA" CHIAVE. Questa morte cellulare, affermano, è causata dal "virus". Tuttavia, come vedrai, il Dr. Kaufman smonta questa affermazione.

Non c'è alcun motivo per dedurre che SARS-CoV-2 sia nella zuppa o che stia uccidendo le cellule.

Infine, i ricercatori affermano, senza prove o spiegazioni razionali, di essere stati in grado di scoprire la sequenza genetica del "virus" che non hanno mai isolato. "Non l'abbiamo trovato, non ne sappiamo nulla, ma l'abbiamo sequenziato".

Ecco le dichiarazioni dello studio che rivendicano l'isolamento, alternate all'analisi del Dr. Kaufman:

STUDIO: “Abbiamo usato cellule Vero CCL-81 per l'isolamento e il passaggio iniziale [nella zuppa in laboratorio]…

KAUFMAN: “Le cellule Vero sono cellule estranee provenienti dai reni delle scimmie e fonte di contaminazione. Le particelle virali dovrebbero essere purificate direttamente dai campioni clinici per dimostrare che il virus esiste realmente. Isolamento significa separazione da tutto il resto. Quindi, come puoi separare/isolare un virus quando lo aggiungi a qualcos'altro?"

STUDIO: “…Abbiamo coltivato cellule Vero E6, Vero CCL-81, HUH 7.0, 293T, A549 ed EFKB3 in terreno minimo essenziale Dulbecco (DMEM) integrato con siero fetale bovino inattivato al calore (5% o 10%)…

KAUFMAN: “Perché usare i media essenziali minimi, che forniscono un'alimentazione incompleta [alle cellule]? Il siero fetale bovino è una fonte di materiale genetico estraneo e vescicole extracellulari, che sono indistinguibili dai virus”.

STUDIO: “…Abbiamo utilizzato campioni di tampone sia NP che OP per l'isolamento del virus. Per l'isolamento, la diluizione limite e il passaggio 1 del virus, abbiamo pipettato 50 µl di DMEM privo di siero nelle colonne 2–12 di una piastra di coltura tissutale da 96 pozzetti, quindi abbiamo pipettato 100 µl di campioni clinici nella colonna 1 e diluito in serie 2 -piega sul piatto…”

KAUFMAN: “Ancora una volta, uso improprio della parola isolamento”.

STUDIO: “…Abbiamo quindi tripsinizzato e risospeso le cellule Vero in DMEM contenente il 10% di siero bovino fetale, 2× penicillina/streptomicina, 2× antibiotici/antimicotici e 2× anfotericina B ad una concentrazione di 2,5 × 105 cellule/mL…

KAUFMAN: “La tripsina è un enzima pancreatico che digerisce le proteine. Non causerebbe danni alle cellule e alle particelle nella coltura che hanno proteine ​​sulla loro superficie, inclusa la cosiddetta proteina spike?"

KAUFMAN: “Perché vengono aggiunti gli antibiotici? Per la coltura viene utilizzata la tecnica sterile. I batteri possono essere facilmente filtrati dal campione clinico mediante filtri disponibili in commercio (GIBCO) [5]. Infine, i batteri possono essere facilmente visti al microscopio e sarebbero facilmente identificati se contaminassero il campione. Gli antibiotici specifici utilizzati, streptomicina e anfotericina (nota anche come "anfoterribili"), sono tossici per i reni e in questo esperimento stiamo usando cellule renali! Si noti inoltre che vengono utilizzati a una concentrazione "2X", che sembra essere il doppio della quantità normale. Questi sicuramente danneggeranno le celle Vero”.

STUDIO: “…Abbiamo aggiunto [ non isolato ] 100 μL di sospensione cellulare direttamente alle diluizioni del campione clinico e miscelato delicatamente pipettando. Abbiamo quindi coltivato le colture inoculate in un incubatore umidificato a 37 ° C in un'atmosfera di 5% CO2 e osservato giornalmente per gli effetti citopatici (CPE). Abbiamo usato saggi di placca standard per SARS-CoV-2, che si basavano sui protocolli SARS-CoV e sindrome respiratoria del Medio Oriente coronavirus (MERS-CoV)…”

STUDIO: "Quando sono stati osservati CPE, abbiamo raschiato i monostrati cellulari con il retro di una punta di pipetta..."

KAUFMAN: “Non è stato descritto alcun esperimento di controllo negativo. Sono necessari esperimenti di controllo per una valida interpretazione dei risultati. Senza questo, come possiamo sapere se è stata la zuppa tossica di antibiotici, nutrizione minima e tessuto morente di una persona malata a causare il danno cellulare o un virus fantasma? Un controllo adeguato consisterebbe nello stesso esatto esperimento, tranne per il fatto che il campione clinico dovrebbe provenire da una persona con una malattia non correlata al covid, come il cancro, poiché non conterrebbe un virus”.

STUDIO: “…Abbiamo usato 50 μL di lisato virale per l'estrazione dell'acido nucleico totale per i test di conferma e il sequenziamento. Abbiamo anche usato 50 μL di lisato virale per inoculare un pozzetto di una piastra a 24 pozzetti confluenti al 90%”.

KAUFMAN: “Come si conferma qualcosa che non è mai stato dimostrato in precedenza? Con cosa hai confrontato le sequenze genetiche? Come fai a sapere l'origine del materiale genetico dal momento che proviene da una coltura cellulare contenente materiale umano e tutta la loro microflora, vacche fetali e scimmie?

citazioni di fine studio e analisi di Kaufman

I miei commenti: il Dr. Kaufman fa diverse cose qui. Egli mostra che l'isolamento, in qualsiasi senso significativo della parola "isolamento", non sta avvenendo.

Il Dr. Kaufman mostra che i ricercatori vogliono usare il danno alle cellule e la morte cellulare come prova che "il virus" è nella zuppa che stanno creando. In altre parole, i ricercatori presumono che se le cellule stanno morendo, e che deve essere il virus a ucciderle. Ma il dottor Kaufman mostra che ci sono altre ovvie ragioni per il danno cellulare e la morte che non hanno nulla a che fare con un virus. Pertanto, non esiste alcuna prova che "il virus" sia nella zuppa o che esista affatto.

E infine, il dottor Kaufman spiega che l'affermazione del sequenziamento genetico del "virus" è assurda, perché non ci sono prove che il virus sia presente. Come metti in sequenza qualcosa quando non hai mostrato che esiste?

I lettori che non conoscono il mio lavoro (oltre 300 articoli sul tema della “pandemia” nell'ultimo anno [6]) chiederanno: Allora perché le persone muoiono? E l'enorme numero di casi e morti? Ho risposto a queste e ad altre domande in modo molto dettagliato. L'oggetto di questo articolo è: i ricercatori hanno dimostrato l'esistenza di SARS-CoV-2?

La risposta è no.

FONTI:

[1] https://www.andrewkaufmanmd.com/sovi/

[2a] Isolamento, caratterizzazione e analisi dei batteriofagi dal lago aloalcalino Elmenteita, KenyaJuliah Khayeli Akhwale et al, PLOS One, Pubblicato: 25 aprile 2019. https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/ journal.pone.0215734 — accesso il 15/2/21

[2b] "Vescicole extracellulari derivate da cellule apoptotiche: un legame essenziale tra morte e rigenerazione", Maojiao Li1 et al, Frontiers in Cell and Developmental Biology, 2 ottobre 2020 https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fcell.2020.573511/full — accesso il 15/02/21

[2c] "Il ruolo delle vescicole extraellulari come alleati dei virus HIV, HCV e SARS", Flavia Giannessi, et al, Viruses, 2020 maggio

[3] https://andrewkaufmanmd.com/

[4] https://wwwnc.cdc.gov/eid/article/26/6/20-0516_article

[5] https://www.thermofisher.com/us/en/home.html

[6] https://blog.nomorefakenews.com/category/covid/

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